Важнейшим компонентом валидации очистки является отбор проб. Цель отбора проб – обеспечить точное представление об уровне чистоты оборудования. Валидация процесса очистки осуществляется путем отбора проб после очистки (АФС или готовый продукт, моющее средство и, при необходимости, бионагрузка) и перед использованием (бионагрузка). Пробы остатков отбираются только с поверхностей, непосредственно контактирующих с продуктом.
Как и в любом другом процессе, отбор проб для валидации очистки должен осуществляться в соответствии с утвержденным протоколом или процедурой, в которой четко определено, где и как отбирать пробы. Персонал, отбирающий пробы, должен быть обучен и квалифицирован, а метод тестирования должен быть валидирован в диапазоне испытаний.
Первый этап для оценки чистоты оборудования – это визуальная проверка чистоты всей единицы оборудования. Перед отбором других проб оборудование должно быть оценено визуально. Если оборудование не прошло визуальную проверку, очистка считается неудачной и дальнейшие пробы не отбираются, кроме как в качестве варианта для последующего расследования.
Одним из основных этапов валидации очистки оборудования является выбор оптимального метода обнаружения остатков. Существует два основных типа методов отбора проб, широко используемых в исследованиях по валидации очистки и в ходе рутинного мониторинга фармацевтического оборудования и поверхностей: прямой отбор проб с поверхности (свабы или контактные пластины) и косвенный (отбор проб жидкости после ополаскивания). При прямом отборе проб образец отбирается непосредственно с поверхности оборудования и измеряется уровень остаточного загрязнения. Примером такого подхода является отбор проб с помощью свабов, который предпочитают регуляторные органы (например, FDA), поскольку он предполагает физическое удаление любой пробы с поверхности оборудования. Хотя прямой отбор проб предпочтительнее, он не всегда практичен (например, для труб или шлангов). В таких случаях оптимальным вариантом является косвенный отбор проб. При косвенном отборе проб образец берется с поверхности оборудования с помощью среды (например, воды), а затем в среде измеряется уровень остаточного загрязнения.
Коэффициент извлечения (Recovery Factor (RF)) для проверки остатков является важным элементом любого испытания в рамках валидации очистки. При отборе пробы в рамках валидации очистки не все остатки могут быть удалены с оборудования. Для определения количества остатков, постоянно удаляемых с поверхностей оборудования при отборе проб, необходимо провести исследование извлечения с использованием заданных параметров. Данный RF затем применяется к отбираемым образцам по мере необходимости для получения точных данных об эффективности процесса очистки. RF специфичен для каждого анализируемого вещества (например, API, моющее средство) для каждого типа материала. С точки зрения рисков, связанных с соблюдением нормативных требований, необходимо максимально ограничить вариабельность параметров извлечения.
Отбор проб методом свабов
Отбор проб методом свабов является критическим параметром в валидированной программе очистки и необходим для точного определения количества остаточного API для данного процесса очистки или оборудования.
Отбор проб методом свабов следует проводить, когда:
Преимущества и недостатки отбора проб методом сваба
Преимущества
Недостатки
Параметры при отборе проб методом сваба должны быть максимально постоянны для продуктов и оборудования. Например, изменение площади мазка с 25 см2 до 100 см2 может показаться необходимым для некоторых остатков, но при изменении параметров необходимо провести оценку риска, чтобы определить, нужно ли повторять исследование извлечения вещества.
При взятии проб необходимо всегда надевать перчатки. При соблюдении надлежащих процедур во время отбора проб не должно быть контакта с поверхностями оборудования, кроме самого сваба. В случае, если используются растворители для мазков соответствующего класса (например, органические вещества класса ВЭЖХ), повторная очистка оборудования после отбора проб не требуется. Решение о необходимости повторной очистки оборудования после отбора проб должно приниматься в ходе оценки рисков.
Купоны материалов изготовления (material of construction (MOC))
Использование купонов из того же материала, что и производственное или упаковочное оборудование, необходимо для обеспечения точного измерения уровня извлечения остатков.
Купоны должны быть из того же материала, что и оборудование, то есть из того же сорта нержавеющей стали, пластмассы, эластомеров. Если купоны недоступны или точный материал не известен, например, пластик, для испытания можно взять реальный образец оборудования.
Следует начать с нержавеющей стали (если данный материал превалирует среди прочих материалов) и переходить к другим материалам. Различные материалы могут быть сгруппированы на основе схожего RF, продемонстрированного с течением времени.
Определение коэффициента извлечения (Recovery Factor (RF))
Допустимым диапазоном приемлемости для определения RF является 70%-110% от нанесенного количества вещества при значении относительного стандартного отклонения (RSD) ≤ 15%. Предпочтительны коэффициенты извлечения, близкие к 100%. Более низкие показатели извлечения могут негативно повлиять на надежность метода очистки и вызвать вопросы о том, где находится не извлечённый материал.
В случае, если извлечение выходит за пределы диапазона 70-110 % или если % RSD составляет более 15 % необходимо провести расследование. Следует исследовать купон, материал для сваба, технику взятия мазка, растворитель для сваба, растворитель для экстракции, условия экстракции.
Если не удается обнаружить причину и разработать программу по улучшению, используйте данные "как есть". Например, если извлечение 50 % нельзя улучшить, используйте его, понимая, что вариабельность, скорее всего, будет выше (> 15 %) и данные будут менее точными. Риск использования этого подхода пропорционален уровню присутствия материала в оборудовании. Незначительное присутствие материала не является ситуацией высокого риска.
Порядок взятия мазков
Порядок взятия нескольких мазков важен для предотвращения перекрестного загрязнения образцов:
1. Пробы на бионагрузку следует отбирать первыми, используя асептические методы, поскольку они наиболее чувствительны к любому загрязнению пробы.
2. Пробы ТОС следует отбирать до отбора проб мазков с органическими растворителями, поскольку они чувствительны к любому загрязнению проб органическими растворителями.
3. Пробы с использованием органических растворителей следует отбирать в последнюю очередь.
Персонал
Персонал всегда считается основным фактором, влияющим на вариабельность данных. Любой трансфер должен оформляться документально с подтверждением коэффициента извлечения на принимающем сайте.
Метод испытания
Метод испытания должен быть валидирован и достаточно чувствителен для измерения образцов на уровнях ниже предела остаточного загрязнения. Предпочтительнее использовать специфический метод (например, ВЭЖХ), но при необходимости допустимо использовать неспецифический метод (например, ТОС). Испытания на бионагрузку часто проводятся с использованием фармакопейных методов в качестве общего теста, а затем при необходимости определяются отдельные виды.
Метод тестирования требует валидации, чтобы количественно определять уровни как можно ниже предела остаточного загрязнения, включая предел количественного определения и предел обнаружения, чтобы данные могли продемонстрировать контроль над процессом очистки.
Точки отбора проб
При расчете предела остаточного загрязнения предполагается, что остаточные загрязнения, оставшиеся на контактных поверхностях оборудования, распределены равномерно по всему оборудованию. Это предположение оправдано только в том случае, если точки отбора проб для сваба являются местами, которые первыми накапливают остатки, последними, которые теряют остатки во время очистки, или трудно очищаемыми по другим причинам. Количество образцов свабов (предлагается от 2 до 7) должно отражать размер и сложность оборудования и давать репрезентативное представление о чистоте очищенного оборудования.
В случае несоответствий в ходе очистки следует проводить более частые испытания, исходя из повышенного риска, а не увеличивать количество точек отбора проб. Кроме того, некоторые предприятия сокращают количество точек после успешного тестирования, но любое сокращение выборки должно быть обосновано. Более эффективным подходом является установление определенного количества проб и увеличение или уменьшение частоты отбора проб в зависимости от риска.
Определение наихудших точек должно быть основано на геометрии оборудования, его сложности, степени разборки и используемом методе очистки. Настоятельно рекомендуется включать рисунки или фотографии точек отбора проб для обеспечения точности отбора проб.
Отбор проб жидкости после ополаскивания (метод смывов)
Отбор проб жидкости после ополаскивания является примером непрямого (косвенного) метода отбора проб, поскольку любые остатки на поверхности не берутся непосредственно с поверхности оборудования. Он выполняется путем отбора аликвоты либо конечного ополаскивателя, либо отдельной пробы ополаскивателя с оборудования после очистки. Отсутствие остатков в образце ополаскивателя означает отсутствие остатков на фактической поверхности.
Для тестирования остатков также требуется определение коэффициента извлечения.
Предпочтительно, чтобы эти образцы отбирались в сочетании с прямым методом отбора проб. Самостоятельный отбор проб ополаскивателя может использоваться для непрерывной верификации процесса очистки (этап 3 валидации) или мониторинга эффективности очистки.
Объем ополаскивателя для промывки
Во избежание излишнего разбавления образца следует использовать минимальное количество растворителя. Общей отправной точкой является объем в пределах 0,5-1 мл/см2, но он сильно зависит от того, насколько сложной является поверхность, с которой отбирается проба (например, сетчатая пластина требует гораздо большего объема, чем игла наполнения).
При определении объема ополаскивателя для оборудования необходимо учитывать следующие факторы:
При расчете объема использованного растворителя для ополаскивания следует помнить, что количество растворителя, использованного при ополаскивании, не восстанавливается на 100% из-за потерь при испарении и остатков растворителя на поверхности пробы.
Необходимо рассчитать соотношение объема использованного растворителя для ополаскивания к площади поверхности очищаемого оборудования и использовать его в исследованиях по извлечению проб ополаскивателя.
Отбор проб на бионагрузку и эндотоксины
Для поверхностных загрязнений, таких как микроорганизмы и эндотоксины, очень важно валидировать методы отбора проб (прямые и непрямые) в сочетании с выбранным методом тестирования, чтобы исключить попадание микроорганизмов в производственный процесс. Метод свабов обычно включает в себя смачивание сваба валидированным раствором для экстракции, чтобы систематически отбирать пробы на измеряемой площади; в то время как использование контактных пластин предполагает прикосновение ростовой среды к поверхности оборудования.
Существуют коммерчески доступные наборы для проверки чистоты, специально разработанные для взятия мазков с поверхностей на наличие эндотоксинов и бионагрузки; однако контактные пластины эффективны только для извлечения микроорганизмов. Пределы для эндотоксинов и бионагрузки должны быть установлены как для образцов ополаскивателя, так и для образцов с поверхности. Прежде чем оценивать эффективность процесса очистки, необходимо завершить исследования по извлечению эндотоксинов и микроорганизмов. В отсутствие такого валидационного исследования производитель может ошибочно предположить, что оборудование является чистым, основываясь на отрицательных результатах.
Как и в любом другом процессе, отбор проб для валидации очистки должен осуществляться в соответствии с утвержденным протоколом или процедурой, в которой четко определено, где и как отбирать пробы. Персонал, отбирающий пробы, должен быть обучен и квалифицирован, а метод тестирования должен быть валидирован в диапазоне испытаний.
Первый этап для оценки чистоты оборудования – это визуальная проверка чистоты всей единицы оборудования. Перед отбором других проб оборудование должно быть оценено визуально. Если оборудование не прошло визуальную проверку, очистка считается неудачной и дальнейшие пробы не отбираются, кроме как в качестве варианта для последующего расследования.
Одним из основных этапов валидации очистки оборудования является выбор оптимального метода обнаружения остатков. Существует два основных типа методов отбора проб, широко используемых в исследованиях по валидации очистки и в ходе рутинного мониторинга фармацевтического оборудования и поверхностей: прямой отбор проб с поверхности (свабы или контактные пластины) и косвенный (отбор проб жидкости после ополаскивания). При прямом отборе проб образец отбирается непосредственно с поверхности оборудования и измеряется уровень остаточного загрязнения. Примером такого подхода является отбор проб с помощью свабов, который предпочитают регуляторные органы (например, FDA), поскольку он предполагает физическое удаление любой пробы с поверхности оборудования. Хотя прямой отбор проб предпочтительнее, он не всегда практичен (например, для труб или шлангов). В таких случаях оптимальным вариантом является косвенный отбор проб. При косвенном отборе проб образец берется с поверхности оборудования с помощью среды (например, воды), а затем в среде измеряется уровень остаточного загрязнения.
Коэффициент извлечения (Recovery Factor (RF)) для проверки остатков является важным элементом любого испытания в рамках валидации очистки. При отборе пробы в рамках валидации очистки не все остатки могут быть удалены с оборудования. Для определения количества остатков, постоянно удаляемых с поверхностей оборудования при отборе проб, необходимо провести исследование извлечения с использованием заданных параметров. Данный RF затем применяется к отбираемым образцам по мере необходимости для получения точных данных об эффективности процесса очистки. RF специфичен для каждого анализируемого вещества (например, API, моющее средство) для каждого типа материала. С точки зрения рисков, связанных с соблюдением нормативных требований, необходимо максимально ограничить вариабельность параметров извлечения.
Отбор проб методом свабов
Отбор проб методом свабов является критическим параметром в валидированной программе очистки и необходим для точного определения количества остаточного API для данного процесса очистки или оборудования.
Отбор проб методом свабов следует проводить, когда:
- Имеется доступ, необходимый для прямого отбора проб (например, разобранные детали, открытое оборудование), включая использование удлинителя для достижения требуемых зон (например, внутренних поверхностей резервуаров)
- Можно определить наихудшие места для взятия мазка
Преимущества и недостатки отбора проб методом сваба
Преимущества
- Физическое удаление остатков с поверхностей
- Пробы отбираются из наихудших мест
- Небольшой объем экстракции, что позволяет измерять меньшее количество остатков
Недостатки
- Пробы отбираются на небольшой площади
- Невозможно получить доступ к некоторым местам (например, трубопроводам)
Параметры при отборе проб методом сваба должны быть максимально постоянны для продуктов и оборудования. Например, изменение площади мазка с 25 см2 до 100 см2 может показаться необходимым для некоторых остатков, но при изменении параметров необходимо провести оценку риска, чтобы определить, нужно ли повторять исследование извлечения вещества.
При взятии проб необходимо всегда надевать перчатки. При соблюдении надлежащих процедур во время отбора проб не должно быть контакта с поверхностями оборудования, кроме самого сваба. В случае, если используются растворители для мазков соответствующего класса (например, органические вещества класса ВЭЖХ), повторная очистка оборудования после отбора проб не требуется. Решение о необходимости повторной очистки оборудования после отбора проб должно приниматься в ходе оценки рисков.
Купоны материалов изготовления (material of construction (MOC))
Использование купонов из того же материала, что и производственное или упаковочное оборудование, необходимо для обеспечения точного измерения уровня извлечения остатков.
Купоны должны быть из того же материала, что и оборудование, то есть из того же сорта нержавеющей стали, пластмассы, эластомеров. Если купоны недоступны или точный материал не известен, например, пластик, для испытания можно взять реальный образец оборудования.
Следует начать с нержавеющей стали (если данный материал превалирует среди прочих материалов) и переходить к другим материалам. Различные материалы могут быть сгруппированы на основе схожего RF, продемонстрированного с течением времени.
Определение коэффициента извлечения (Recovery Factor (RF))
Допустимым диапазоном приемлемости для определения RF является 70%-110% от нанесенного количества вещества при значении относительного стандартного отклонения (RSD) ≤ 15%. Предпочтительны коэффициенты извлечения, близкие к 100%. Более низкие показатели извлечения могут негативно повлиять на надежность метода очистки и вызвать вопросы о том, где находится не извлечённый материал.
В случае, если извлечение выходит за пределы диапазона 70-110 % или если % RSD составляет более 15 % необходимо провести расследование. Следует исследовать купон, материал для сваба, технику взятия мазка, растворитель для сваба, растворитель для экстракции, условия экстракции.
Если не удается обнаружить причину и разработать программу по улучшению, используйте данные "как есть". Например, если извлечение 50 % нельзя улучшить, используйте его, понимая, что вариабельность, скорее всего, будет выше (> 15 %) и данные будут менее точными. Риск использования этого подхода пропорционален уровню присутствия материала в оборудовании. Незначительное присутствие материала не является ситуацией высокого риска.
Порядок взятия мазков
Порядок взятия нескольких мазков важен для предотвращения перекрестного загрязнения образцов:
1. Пробы на бионагрузку следует отбирать первыми, используя асептические методы, поскольку они наиболее чувствительны к любому загрязнению пробы.
2. Пробы ТОС следует отбирать до отбора проб мазков с органическими растворителями, поскольку они чувствительны к любому загрязнению проб органическими растворителями.
3. Пробы с использованием органических растворителей следует отбирать в последнюю очередь.
Персонал
Персонал всегда считается основным фактором, влияющим на вариабельность данных. Любой трансфер должен оформляться документально с подтверждением коэффициента извлечения на принимающем сайте.
- Техника взятия мазков должна быть акцентирована во время обучения и квалификации персонала
- Необходимо убедиться, что весь персонал использует утвержденную методику
- Следует квалифицировать персонал, если для отбора проб на определенных участках оборудования используется дополнительное оборудование (например, удлинитель)
- Следует квалифицировать персонал, обеспечив как минимум трехкратное повторение теста выбранного остаточного загрязнения с использованием сваба, растворителя и площади поверхности, используемой для отбора проб. Необходимо установить критерии приемлемости для квалификации свабов. Например, среднее значение трех извлечений находится в пределах ± 10% от установленного RF с вариабельностью ≤ 15% RSD.
Метод испытания
Метод испытания должен быть валидирован и достаточно чувствителен для измерения образцов на уровнях ниже предела остаточного загрязнения. Предпочтительнее использовать специфический метод (например, ВЭЖХ), но при необходимости допустимо использовать неспецифический метод (например, ТОС). Испытания на бионагрузку часто проводятся с использованием фармакопейных методов в качестве общего теста, а затем при необходимости определяются отдельные виды.
Метод тестирования требует валидации, чтобы количественно определять уровни как можно ниже предела остаточного загрязнения, включая предел количественного определения и предел обнаружения, чтобы данные могли продемонстрировать контроль над процессом очистки.
Точки отбора проб
При расчете предела остаточного загрязнения предполагается, что остаточные загрязнения, оставшиеся на контактных поверхностях оборудования, распределены равномерно по всему оборудованию. Это предположение оправдано только в том случае, если точки отбора проб для сваба являются местами, которые первыми накапливают остатки, последними, которые теряют остатки во время очистки, или трудно очищаемыми по другим причинам. Количество образцов свабов (предлагается от 2 до 7) должно отражать размер и сложность оборудования и давать репрезентативное представление о чистоте очищенного оборудования.
В случае несоответствий в ходе очистки следует проводить более частые испытания, исходя из повышенного риска, а не увеличивать количество точек отбора проб. Кроме того, некоторые предприятия сокращают количество точек после успешного тестирования, но любое сокращение выборки должно быть обосновано. Более эффективным подходом является установление определенного количества проб и увеличение или уменьшение частоты отбора проб в зависимости от риска.
Определение наихудших точек должно быть основано на геометрии оборудования, его сложности, степени разборки и используемом методе очистки. Настоятельно рекомендуется включать рисунки или фотографии точек отбора проб для обеспечения точности отбора проб.
Отбор проб жидкости после ополаскивания (метод смывов)
Отбор проб жидкости после ополаскивания является примером непрямого (косвенного) метода отбора проб, поскольку любые остатки на поверхности не берутся непосредственно с поверхности оборудования. Он выполняется путем отбора аликвоты либо конечного ополаскивателя, либо отдельной пробы ополаскивателя с оборудования после очистки. Отсутствие остатков в образце ополаскивателя означает отсутствие остатков на фактической поверхности.
Для тестирования остатков также требуется определение коэффициента извлечения.
Предпочтительно, чтобы эти образцы отбирались в сочетании с прямым методом отбора проб. Самостоятельный отбор проб ополаскивателя может использоваться для непрерывной верификации процесса очистки (этап 3 валидации) или мониторинга эффективности очистки.
Объем ополаскивателя для промывки
Во избежание излишнего разбавления образца следует использовать минимальное количество растворителя. Общей отправной точкой является объем в пределах 0,5-1 мл/см2, но он сильно зависит от того, насколько сложной является поверхность, с которой отбирается проба (например, сетчатая пластина требует гораздо большего объема, чем игла наполнения).
При определении объема ополаскивателя для оборудования необходимо учитывать следующие факторы:
- Объем растворителя для ополаскивания (или способ его подачи) должен быть достаточным для обеспечения контакта растворителя со всеми контактными поверхностями
- Растворитель должен контактировать с поверхностью изделия в течение времени, достаточного для растворения любых остатков материала
- Большой объем ополаскивателя может привести к разбавлению образца ниже предела количественного определения аналитического метода
При расчете объема использованного растворителя для ополаскивания следует помнить, что количество растворителя, использованного при ополаскивании, не восстанавливается на 100% из-за потерь при испарении и остатков растворителя на поверхности пробы.
Необходимо рассчитать соотношение объема использованного растворителя для ополаскивания к площади поверхности очищаемого оборудования и использовать его в исследованиях по извлечению проб ополаскивателя.
Отбор проб на бионагрузку и эндотоксины
Для поверхностных загрязнений, таких как микроорганизмы и эндотоксины, очень важно валидировать методы отбора проб (прямые и непрямые) в сочетании с выбранным методом тестирования, чтобы исключить попадание микроорганизмов в производственный процесс. Метод свабов обычно включает в себя смачивание сваба валидированным раствором для экстракции, чтобы систематически отбирать пробы на измеряемой площади; в то время как использование контактных пластин предполагает прикосновение ростовой среды к поверхности оборудования.
Существуют коммерчески доступные наборы для проверки чистоты, специально разработанные для взятия мазков с поверхностей на наличие эндотоксинов и бионагрузки; однако контактные пластины эффективны только для извлечения микроорганизмов. Пределы для эндотоксинов и бионагрузки должны быть установлены как для образцов ополаскивателя, так и для образцов с поверхности. Прежде чем оценивать эффективность процесса очистки, необходимо завершить исследования по извлечению эндотоксинов и микроорганизмов. В отсутствие такого валидационного исследования производитель может ошибочно предположить, что оборудование является чистым, основываясь на отрицательных результатах.